乳腺癌微转移新检测方法的研究

摘要

目的：乳腺癌作为一种全身性疾病，具有早期转移和复发的特点。差的预后提示可能在原发肿瘤诊断时就有微转移发生，而常规临床检查常常不能估计,近年来，随着分子生物学的发展及逆转录聚合酶链式反应技术(RT-PCR)等技术的应用以及新的肿瘤标志物的出现，为乳腺癌微转移诊断提供了新的途径。本研究同时以CK19mRNA、hMAM mRNA和CK19、hMAM为诊断标记物，对它们在乳腺癌患者腋淋巴结及外周血中的表达进行研究，探讨其表达与微转移的关系及临床应用价值。方法：同时采用免疫组织化学的方法(IHC两步法)和RT-PCR技术以CK19、hMAM及CK19 mRNA、hMAM mRNA多参数为检测指标，检测其在乳腺癌腋淋巴结及乳腺癌患者外周血中的表达情况。结果：1、乳腺癌腋淋巴结微转移的检测：(1)以细胞角蛋白CK19为检测指标，首先应用IHC方法检测CK19在乳腺癌淋巴结中的表达，47例病例中，在常规病理阴性的淋巴结中检出微小转移5例，检出率为14.28%( 5/35)，敏感度为82.35%( 14/17)．准确率为93.62%( 44/47)，假阴性率为9.09%( 3/33)．同时应用RT-PCR法检测乳腺癌淋巴结微转移，在常规病理阴性的淋巴结中检出微小转移17例，检出率达到48.57%( 17/35)，使其敏感度升至96.55%( 28/29)．准确率升至97.88%（46/47），假阴性率降至5.26%( 1/19)．结果表明IHC法及Rr-CR法均能检出常规病理检查不能发现的微转移灶，提高淋巴结的微转移的检出率，但RT-PCR法的检出率明显高于IHC法(X2=6.1765，P<0.05)．ALN微转移与病理类型、临床分期、组织学分级、肿瘤部位、激素受体状态及年龄等临床指标均未见明显相关性．(2)以人乳腺珠蛋白hMAM为标志物，对47例淋巴结标本采用IHC和RT-PCR法同时检测，结果显示，常规病理掌检查阴性的淋巴结中，IHC法中有4.28%( 5/35)表达hMAM，RT-PCR法中淋巴结hMAM mRNA表达率升至25.710（9/35）．且IHC法检测阳性的病例在RT-PCR法中其hMAM mRNA表达均为阳性。两者检出率有统计学差异（X2=16.8519，P0.05)．2、乳腺癌患者外周血微转移的检测：以人乳腺珠蛋白hMAM mRNA为标志物，共检测乳腺癌患者外周血28例，其中9例外周血中hMAM mRNA表达阳性，检出率为32.14%．5例正常乳腺者外周血中hMAM mRNA表达均为阴性，两者比较hMAM mRNA阳性表达差异具有显著性意义（P<0.05）．乳腺癌患者外周血hMAMmRNA表达阳性率在患者的不同年龄、临床分期、肿瘤位置、ER和PR状态的各组间差异无显著性(P>0.05)，淋巴结转移阳性病例hMAM mRNA阳性检出率为42.86%，明显高于淋巴结转移阴性组（P>0.05），提示淋巴结转移阳性患者肿瘤细胞血行播散的危险性有增加趋势．结论：以细胞角蛋白CKl9和人乳腺珠蛋白hMAM为标志物，采用IHC和RT-PCR法均为乳腺癌腋淋巴结微小转移的检测方法，且RT-PCR法比IHC法更敏感．说明RT-PCR法是对传统的IHC法一个很好的补充，可以明显提高乳腺癌患者淋巴结微小转移的检出率．同时利用RT-PCR检测外周血中hMAM mRNA的表达以判断是否存在循环癌细胞，对于判断肿瘤预后及指导方案的选择都具有重要的意义．