基于单链抗体黄绿青霉素胶体金检测卡的制备

摘要

黄绿青霉素(Citreoviridin,CIT)是一种具有毒性的小分子真菌毒素,由黄绿青霉菌(Penicillum Citreoviridin,PCV)在低温高湿度等的恶劣环境中分泌产生的,其广泛存在于谷类农作物和农副产品中.CIT毒素具有神经毒性作用,可抑制中枢神经系统,严重的甚至会引起死亡.很多研究表明CIT是引起心脏性脚气病主要病因。到目前为止，中国和其他国家的相关监管机构并未建立CIT在食品中的安全限制范围，同时基于液相色谱等常规检测方法通常是耗时的、昂贵的，并不适合检测大量的样品。因此，建立一个快速、简便和灵敏的基于免疫学方法检测CIT毒素是势在必行的。本研究主要利用基因工程手段，通过错易PCR构建了一个库容量为2.0X108cfu/ml抗CIT的突变体单链抗体库，并结合噬菌体淘选技术最终获得了一株高亲和力scFv抗体。将抗体基因克隆到含有可溶性标签麦芽糖结合蛋白的pBD-mbp-his-linker载体上，从而获得了可溶的高亲和力抗体。通过将纳米金标记在scFv抗体上，并建立基于单链抗体黄绿青霉素胶体金检测平台，为实现体外黄绿青霉素高灵敏度，高特异性胶体金检测奠定坚实的基础。